Vitamin là những chất không sinh năng lượng nhưng không thể thiếu được đối với sự tồn tại và phát triển của cơ thể sống. Tất cả các quá trình sống gắn liền với sự trao đổi chất trong cơ thể có sự tham gia trực tiếp của vitamin. Trong bài báo này, chúng tôi đã khảo sát các điều kiện tối ưu, xác định hàm lượng vitamin D2 bằng phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu năng (UHPLC). Giới hạn phát hiện (LOD) là 0,0064 μg/g, giới hạn định lượng (LOQ) là 0,0195 μg/g. Độ lặp lại và độ thu hồi tốt phù hợp với yêu cầu đặt ra của AOAC. Quy trình phân tích đã được áp dụng để xác định hàm lượng vitamin D2 trong một số loài nấm lớn ở vùng Bắc Trung Bộ với độ tin cậy cao. Kết quả phân tích thu được cho thấy hàm lượng vitamin D2 trong các mẫu nấm từ 6,221-11,755 μg/g.